เหล่าผู้พิทักษ์จักรวาลจะต้องร่วมมือกันเพื่อหนีออกมาจากเรือนจำสุดแสนซับซ้อนที่เดอะ คอลเล็คเตอร์สร้างขึ้นมาเพื่อพวกเขาโดยเฉพาะ

เหล่าผู้พิทักษ์จักรวาลมาพบกับสไปเดอร์-แมนในนครนิวยอร์กเพื่อปราบพวกซิมไบโอตสุดแข่งแกร่งของธานอส

ธานอสได้ควบคุมพลังของคาร์เนจซิมไบโอตเพื่อใช้เป็นสุดยอดอาวุธ เหล่าผู้พิทักษ์จักรวาลจึงต้องร่วมมือกับสไปเดอร์-แมนเพื่อต่อกรกับธานอส

เหล่าผู้พิทักษ์จักรวาลสามารถจับกุมตัวธานอสได้แล้ว แต่การส่งตัวอาชญากรที่เป็นที่ต้องการของทั้งกาแล็กซีไม่ใช่เรื่องง่ายเลย

เหล่าผู้พิทักษ์จักรวาลไล่ล่าธานอสและ แซม อเล็กซานเดอร์ (โนว่า) ไปยังดาวไททัน บ้านเกิดของธานอส ที่ซึ่งพวกเขาได้พบกับสนามรบ โดยมี เจสซี่ อเล็กซานเดอร์ พ่อของโนว่าเข้าร่วม

กามอร่าตัดสินใจใช้ความร่ำรวยของเธอชดใช้ให้คนที่เธอเคยกระทำผิดด้วย เมื่อเนบูล่าปรากฏตัวขึ้น กามอร่าพยายามสอนเธอถึงคุณค่าของการทำดี

แดร็กซ์ตัดสินใจว่าเขาไม่อยากจะเป็นจอมทำลายล้างแล้ว เขาจึงเริ่มมองหาอาชีพใหม่

ควิลล์เริ่มต้นทำทอล์กโชว์ของตัวเองหลังจากที่เอาชนะธานอสได้

เหล่าผู้พิทักษ์จักรวาลยังคงถลุงเงินต่อไปขณะรับงานส่งของเล็กๆ น้อยๆ ไปด้วย แต่ปรากฏว่าพวกเขาจะต้องไปขโมยของจากพวกครี และไฟล่า ผู้กล่าวโทษ พร้อมจะทำทุกอย่างเพื่อให้ได้ของชิ้นนั้นกลับมา

เหล่าผู้พิทักษ์จักรวาลพบว่าพวกเขาถูกขังอยู่ในคุก หลังพยายามขโมยหีบห่อลึกลับมาจากพวกครี แต่ทั้งหมดกลับเป็นแค่การจัดฉากโดย เจ้าเป็ดฮาเวิร์ด

เหล่าผู้พิทักษ์จักรวาลตามเจ้าเป็ดฮาเวิร์ดไป เพื่อหาว่าใครเป็นคนจัดฉากและทำเพื่ออะไร แต่ก็ไปได้ไม่ไกลก่อนที่ ไฟล่า ผู้กล่าวโทษจะไล่ตามทันเพื่อพิพากษาพวกเขาตามแบบของครี

ไฟล่า-เวลร่วมมือกับเหล่าผู้พิทักษ์จักรวาลอย่างไม่เต็มใจ เพื่อนำตัวเดอะ คอลเล็คเตอร์ไปพิพากษาที่ทำลายดาวบ้านเกิดของเธอ

เมื่อเหล่าผู้พิทักษ์จักรวาลเข้าตาจน พวกเขาจึงตัดสินใจกระโดดเข้าไปใน แบล็ควอร์เท็กซ์ เพื่อหนีออกจากยานของเดอะ คอลเล็คเตอร์ พวกเขาถูกแยกออกจากกันและพบว่าได้หลุดไปอยู่กันคนละโลก

เหล่าผู้พิทักษ์จักรวาลยังคงสู้ต่อไปใน แบล็ควอร์เท็กซ์ ร็อคเก็ตพยายามตามหากรู้ท เพื่อนรักของเขา และกรู้ทได้มาถึงใจกลางที่เป็นเหมือนฝันร้ายของแบล็ควอร์เท็กซ์

ควิลล์จะต้องหนีออกจากมิลาโน่ที่กำลังพุ่งเข้าหาดวงอาทิตย์ ระหว่างนั้น ร็อคเก็ตและแดร็กซ์ต้องเจอกับความหายนะขณะที่พวกเขาพยายามตามหากรู้ทเพื่อช่วยเขาออกมาจากแบล็ควอร์เท็กซ์

กามอร่าและควิลล์ฝ่าฟันผ่านโลก 8-บิตออกมาและได้กลับมารวมตัวกับเหล่าผู้พิทักษ์จักรวาลที่ใจกลางแบล็ควอร์เท็กซ์ในที่สุด

ในที่สุด เหล่าผู้พิทักษ์จักรวาลก็สามารถหนีออกมาจากแบล็ควอร์เท็กซ์สำเร็จ แต่พวกเขาก็ต้องพบว่ากาแล็กซีถูกพวกหุ่นยนต์ชั่วร้ายที่มีชื่อว่าดาร์กฮอว์ค ซึ่งได้ปลอมตัวเป็นเพื่อนของพวกเขา ยึดครองไปแล้ว

เหล่าผู้พิทักษ์จักรวาลไม่รู้ว่าจะเชื่อใจใครได้ เพราะดูเหมือนดาร์กฮอว์คได้สร้างร่างเสมือนของทุกคนขึ้น รวมถึงควิลล์ด้วย

เหล่าผู้พิทักษ์จักรวาลเดินทางไปยังแอสการ์ดเพื่อช่วยธอร์หยุดยั้งการรุกรานของพวกแบล็กฮอคส์ แต่พวกเขาก็ได้พบว่า ทางเดียวที่จะหยุดพวกมันได้คือไปที่ดินแดนแห่งดาร์กฮอว์ค

เหล่าผู้พิทักษ์จักรวาลเดินทางไปยังดินแดนแห่งดาร์กฮอว์คเพื่อช่วยร่างจริงของเพื่อนๆ ที่ถูกจับไว้ แต่ผู้อยู่เบื้องหลังตัวร้ายอย่างเดอะเซอร์เพนต์ จะไม่ปล่อยให้พวกเขาทำลายแผนของมันเป็นอันขาด

เดอะเซอร์เพนต์โจมตีแอสการ์ดและแพร่เชื้อไปยังเวิร์ลทรี เหล่าผู้พิทักษ์จักรวาลจึงต้องร่วมมือกับโลกิเพื่อหยุดพวกมัน ก่อนที่มันจะใช้ต้นไม้โลกทำลายล้างจักรวาล

ขณะที่เหล่าผู้พิทักษ์จักรวาลเตรียมตัวไปจัดการกับเดอะเซอร์เพนต์ พวกเขาใช้สะพานไบฟรอสต์เดินทางไปทั่วกาแล็กซีเพื่อรวบรวมกองกำลังเสริม

เหล่าผู้พิทักษ์จักรวาลและเพื่อนของพวกเขาออกเดินทางเพื่อตามหาชิ้นส่วนเขี้ยวมังกร อาวุธในตำนานที่จะสามารถกำจัดเดอะเซอร์เพนต์ไปได้ตลอดกาล

เหล่าผู้พิทักษ์จักรวาล พร้อมด้วยโลกิและไอรอนแมนเดินทางไปยังปราสาทของเฮลาจอมชั่วร้ายเพื่อขอให้เธอช่วยปราบเดอะเซอร์เพนต์

หลังจากที่โนว่าคอร์ปถูกโค่นลงและชะตาของทั้งจักรวาลตกอยู่ในอันตราย เหล่าผู้พิทักษ์จักรวาลจำเป็นจะต้องหันไปพึ่งพันธมิตรที่ไม่คาดคิดเพื่อหยุดเดอะเซอร์เพนต์ให้ได้