Vampiros e lobos são rivais há centenas de anos. Em Anjos da Noite, eles travam uma violenta luta para resolver a desavença. Selene, uma bela vampira guerreira, é a líder de seus semelhantes que recebe a ajuda de Michael, um humano que pode ter a chave para acabar com a guerra.

Perseguida pelos seus antigos aliados vampiros, Selene foge com Michael, um híbrido entre lobisomem e vampiro. Enquanto Marcus, o mais antigo vampiro ainda vivo, acorda do seu sono para liderar a caçada contra eles, ambos vão tentar desvendar a teia de segredos e de mentiras que estão por detrás das origens das duas raças imortais e da permanente guerra entre elas.

Este filme, o terceiro da franquia "Underworld", revela as origens da guerra eterna entre vampiros e lycans. Unidas por uma origem comum numa mesma família - o clã Corvino - as duas raças deram origem a monstros distintos. Na Idade Média, os vampiros eram pagos pelos humanos para massacrarem lobisomens descontrolados e eram brutalmente liderados por Viktor, um vampiro ancião. É no seu castelo que nasce Lucian, o primeiro Lycan - um lobisomem capaz de se controlar e mudar de forma apenas quando quer. Vendo a sua utilidade, Viktor cria uma raça de Lycans que escraviza para servirem os vampiros. Mas Lucian apaixona-se secretamente por Sonja, a filha de Viktor, e esse romance ameaça seriamente os planos do líder vampiro.

Finalmente, os seres humanos descobriram a existência dos vampiros e dos lycans, e resolvem exterminá-los como se estivessem doentes com uma incurável patologia, num episódio chamado "A Purga", em meio ao qual Selene e Michael são capturados pelos humanos. Quinze anos mais tarde, Selene acorda num laboratório e descobre que Michael desapareceu e ela estava grávida quando foi capturada, tendo dado à luz uma menina híbrida, Eve, agora adolescente e que nunca viu o mundo fora do laboratório onde era alvo dos estudos humanos. Agora, ambas têm de fugir e esconder-se para sobreviver.

Selene é uma guerreira vampira que luta para acabar com a guerra eterna entre o clã Lycan e a facção de vampiros que a traiu. Quando uma nova ameaça lycan parece tomar forma, ela utiliza a sua influência com ambas as partes para negociar um cessar fogo. Mas a teia de traições pode novamente deitar tudo a perder.