Hauptfiguren der Nachtschicht sind vier Beamte der Nachtschicht-Besetzung des Kriminaldauerdienstes (KDD) in Hamburg: Hauptkommissar Erich Bo Erichsen, Hauptkommissarin Paula Bloom, Kommissarin Mimi Hu sowie der Polizist Teddy Schrader. Erichsen ist im Nachtschicht-Team der erfahrene, aber auch etwas zwielichtige Straßenbulle, Bloom die ebenso einfühlsame wie taffe Polizeipsychologin. Die beiden Neulinge Schrader und Hu repräsentieren die junge Generation im Polizeidienst.