Un estudiant de secundària que va ser abandonat pels seus pares quan era nen, deixant-ho a càrrec del seu oncle Ben (Martin Sheen) i la seva tia May (Sally Field). Com la majoria dels adolescents de la seva edat, Peter tracta d'esbrinar qui és i què vol arribar a ser. Peter també està trobant el seu camí amb el seu primer amor de secundària, Gwen Stacy (Emma Stone), i junts lluiten pel seu amor amb compromís. Quan Peter descobreix un misteriós maletí que va pertànyer al seu pare, comença la cerca per entendre la desaparició dels seus pares, una cerca que li porta directament a Oscorp, el laboratori del Dr Curt Connors (Rhys Ifans), ex-company de treball del seu pare. Mentre Spider-Man es troba en plena col·lisió amb el alter-ego de Connors, el Llangardaix, Peter farà eleccions que alteraran les seves opcions per usar els seus poders i donaran forma a una destinació heroica.